Der molekulare Transformationsmechanismus der MLL-Fusionsproteine ; The molecular transformation mechanism of MLL fusion proteins
In: urn:nbn:de:bvb:29-opus-13311;; (2009)
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Chromosomale Aberrationen am MLL-Locus 11q23 führen zu chimären MLL-Fusionsproteinen. Diese kodieren für aberrante Transkriptionsfaktoren, die die Expression von „A Cluster“ Hox-Genen hochregulieren und infolge dessen akute Leukämien verursachen. Frühere Befunde deuteten an, daß mit MLL fusionierte Proteine mit der transkiptionellen Elongation im Zusammenhang stehen könnten. Zur weiteren Aufklärung dieser Hypothese wurde in dieser Promotionsarbeit ein neuartiger Komplex (EAP, ENL-assoziierte Proteine) aufgereinigt, der neben MLL-Fusionspartnern (AF4, AF5q31, LAF4) und Polycomb-Gruppen-Proteinen (CBX8, BCOR, RING1) auch enzymatische Aktivitäten (pTEFb und DOT1L) enthält, die an der transkriptionellen Elongation beteiligt sind. In Koimmunopräzipitationen und GST-Pulldown Experimenten wurde die Zusammensetzung EAPs bestätigt und näher bestimmt. Desweiteren belegten in vitro Analysen, daß EAP sowohl die H3K79-Dimethylierung als auch die Phosphorylierung der C-terminalen Domäne der RNA-Polymerase II vermittelt. Darüberhinaus erbrachten in vivo Knockdown-Studien den Nachweis, daß EAP an der globalen transkriptionellen Elongation und H3K79-Dimethylierung beteiligt ist. Außerdem spielt EAP eine Rolle bei der HOXA9 Genregulation und der Transaktivierung von Promotoren. Um die Stimulierung von Elongationsaktivität durch MLL-Fusionsproteine per se und im Kontext mit MLL-Fusionen näher zu charakterisieren, wurden Koimmunopräzipitationen und ein „Rev-Elongations-Experiment“ durchgeführt. Tatsächlich sind ENL, AF5q31 und AF4 in der Lage, die Elongation durch Rekrutierung von pTEFb zu beeinflussen. Außerdem waren Interaktionen zwischen EAP-Mitgliedern auch in der Fusionssituation konserviert. Interessanterweise verloren Deletionsmutanten, die nicht mehr pTEFb rekrutieren, ihr Transformationspotential. Damit übereinstimmend waren MLL-ENL transformierte Zellinien sensitiv gegenüber dem pTEFb-Inhibitor Flavopiridol. Chromatin-Immunopräzipitationen auf dem Hoxa9-Locus wiesen zudem darauf hin, daß H3K79-Dimethylierung eine ...
Titel: |
Der molekulare Transformationsmechanismus der MLL-Fusionsproteine ; The molecular transformation mechanism of MLL fusion proteins
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Autor/in / Beteiligte Person: | Müller, Dorothee |
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Quelle: | urn:nbn:de:bvb:29-opus-13311;; (2009) |
Veröffentlichung: | 2009 |
Medientyp: | Hochschulschrift |
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